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信帆生物答疑:明膠酶譜試劑盒在操作時候的注意事項

發布時間: 2018-02-25  點擊次數: 1284次

信帆生物告知您:明膠酶譜試劑盒在操作時候的注意事項!

本公司銷售基質金屬蛋白酶MMP2/MMP9明膠酶譜試劑盒,很多老師在使用的時候出不來條帶,信帆生物為您答疑解惑:

做不出來的原因:

1.樣本失活

2.電泳操作不對

3.孵育時間不夠

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注意事項:

1.制備聚丙烯酰胺時應注意排除氣泡。

2.明膠酶譜的活性受鈣離子,鋅離子,和PH值等因素的影響,因此緩沖液配制應嚴格準確,盡量用超純水,孵育溫度也掌握好。

3.用大梳子

4.孵育液的PH在7.5-7.6,復性的TRITON時間長了會有絮狀物,所以實驗時盡量使用新鮮配置的。

5.孵育的37度不要在CO2培養箱中,因為會改變孵育液的PH值,在普通孵箱即可。

6.細胞樣本用PBS 5倍體積震蕩裂解,估算細胞的體積,然后加入5倍體積的PBS,渦旋振蕩15-30s,而后靜置或低速離心.或者手動震蕩。

7.組織或者細胞的話可以用PBS,也可以用低滲溶液如三分之一或者四分之一的生理鹽水按照5倍體積加入后震蕩裂解細胞,離心即可,步驟和提蛋白很相似即可,其實重點的步驟主要是采用低滲裂解液進行裂解,組織的話可以勻漿20-30次,然后10000轉左右離心,5分鐘取上清即可。

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